Болезни собак: 184 / Книги о животных / Мир животных.ру

Целлоидиновые срезы обрабатывают в следующей последовательности: красят 20 мин
гематоксилином Эрлиха; промывают в воде; дифференцируют в 1%-ном солянокислом
спирте; промывают в воде; красят в растворе эозина (1 часть 1%-ного водного эозина и 3
части 96°-ного спирта) 35-48 ч в зависимости от толщины среза; контролируют под
микроскопом; промывают в воде; дифференцируют в щелочном спирте (15 см3 96°-ного
спирта и 2 капли 1%-ного водного раствора едкого натра) 0,5-2 мин в зависимости от
толщины среза; дифференцируют в кислом спирте (15 см3 96°-ного спирта и 2 капли 50%-
ной ледяной уксусной кислоты) – 1-2 погружения; споласкивают в 96°-ном спирте; красят
карболксилолом, ксилолом и бальзамом.
Приготовление краски. Растворяют 4 г гематоксилина в 25 мл абсолютного спирта и
смешивают с 400 мл насыщенного раствора аммиачных квасцов (40 г квасцов на 400 г
дистиллированной воды). Смесь оставляют в открытом сосуде под марлей на 4 дня, затем ее
фильтруют и к фильтрату добавляют по 100 г метилового спирта и глицерина. Краску
оставляют на 2 нед. в колбе, снова фильтруют и хранят в хорошо закрытом темном сосуде.
Наилучшей окрашивающей способностью она обладает через 2 мес после приготовления.
Приготовление мазков и их окраска. На чистое обезжиренное стекло наносят каплю
физиологического раствора. Концом скальпеля, которым сделали соскоб со слизистой
оболочки мочевого пузыря, осторожно касаются капли с таким расчетом, чтобы клетки
постепенно смывались в раствор. Такая осторожность необходима, чтобы не разрушить
протоплазму клеток. Затем шлифованным стеклом делают мазок, высушивают его на воздухе
и фиксируют в метиловом спирте (хуже – этиловый + эфир в соотношении 1:1) в течение 3
мин. Мазки следует оберегать от солнечных лучей. После высушивания их окрашивают.
На мазок, приготовленный несколько дней назад, наливают физиологический раствор
комнатной температуры и оставляют на 20 мин, затем его сливают и сразу же на мазок
наливают гематоксилин Делафильда. Мазки, приготовленные перед окраской,
физиологическим раствором не обрабатывают. Далее препарат подогревают, быстро
проводят его 5-6 раз над слабым пламенем спиртовки, и следят, чтобы пламя не касалось
мазка. Подогретый препарат окрашивают в течение 20 мин. Затем краску смывают
дистиллированной водой и дифференцируют 0,1%-ным раствором соляной кислоты в
течение 2-3 мин в зависимости от толщины мазка. Мазок хорошо промывают водой и в
течение 5 мин окрашивают 1%-ным водным раствором эозина. Потом эозин смывают, мазок
просушивают и исследуют под микроскопом с иммерсией.
Результаты исследования. Ядра клеток окрашены в голубовато-фиолетовый цвет. Если в
эпителиальных клетках мочевого пузыря здоровых собак видны одно или два хорошо
очерченных грибовидных ядрышка, то в клетках больных чумой ядра в большинстве случаев
дегенерированы (кариорексис, реже пикноз).
Протоплазма клеток окрашена в бледно-розовый цвет, а включения – в красный. Как
правило, включения расположены в протоплазме. В одной клетке их может насчитываться от
одного до десяти. Они отличаются полиморфизмом: форма их чаще округлая или овальная,
встречаются серповидные, прилегающие к ядру, как бы выгибаясь по его контуру. Размеры
включений варьируют от самых маленьких зернышек до величины ядра. Они имеют четкие
границы и ровные края.
Внутриядерные включения встречаются реже; окрашены они в розовый цвет и иногда
заполняют почти все ядро.
Для исследования могут быть использованы мочевые пузыри, хранившиеся в
замороженном состоянии. Включения при этом окрашиваются менее интенсивно, чем в
мазках из свежего материала, но достаточно эффективно для постановки диагноза.
В материале, хранившемся в условиях обычного холодильника (4°С), включения хорошо
окрашиваются на 2-3-й день. На 4-й же день клетки разрушаются развившейся микрофлорой,
а включения окрашиваются плохо, неконтрастно. Включения при чуме могут быть
обнаружены и в гистологических срезах из мочевого пузыря, фиксированных в 12%-ном